Question

【题目】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_____酶作用后获得重组质粒。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_____，平板上长出的菌落，常用 PCR 鉴定，所用的引物组成为图2中_____。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 _____，对于该部位，这两种酶_____(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。

Answer 1

【答案】 BclⅠ和HindⅢ (DNA)连接 四环素 引物甲和引物丙 都不能

【解析】本题以图文结合的形式综合考查学生对基因工程等知识的识记和理解能力，涉及到的知识有限制酶的作用、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定。

(1) 图中信息显示：质粒的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因中都存在BamHⅠ的酶切位点，因此不能选择BamHⅠ进行酶切；目的基因的两端和载体上都有BelⅠ和HindⅢ的酶切位点，可见，用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，应选用BelⅠ和HindⅢ两种限制酶切割。酶切后的载体和目的基因片段，再用DNA连接酶进行连接。

(2) 因构建重组质粒时，目的基因的插入破坏了氨苄青霉素抗性基因，但四环素抗性基因却保持其结构的完整性，所以转入了重组质粒的大肠杆菌可在添加了四环素的培养基表面长出菌落。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，因此若用PCR鉴定图2中的目的基因，所用的引物组成为引物甲和引物丙。

(3) 根据表格分析可知，经BamHⅠ酶切割后产生的黏性末端为，经BclⅠ酶切割后产生的的黏性末端为，即这两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端。若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ()，这两种酶都不能识别该部位，因此都不能将该部位切开。