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    科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达．但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，据图回答：

    （1）过程①表示的是采取
     
    的方法来获取目的基因．基因工程的关键步骤是
     
    ．（用图中数据表示）
    （2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶
     
    切割质粒，形成了
     
    的粘性末端（将粘性末端写出），用限制酶
     
    酶切割目的基因．用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过
     
    原则进行连接，在DNA连接酶的作用下形成了
     
    键．
    （3）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是
     
    ．
    （4）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为
     
    ．写出目的基因导入细菌中表达的过程
     
    ．
    （5）过程③需要用
     
    处理细菌B，使细菌B处于
     
    （状态）．为了检测大肠杆菌B是否导入了重组质粒，需要将它涂布在一个含有
     
    的培养基上，能够生长的，说明已导入了
     
    ，反之则没有导入．
    （6）通过检测
     
    来判断基因工程是否成功，检测的方法是
     
    ．
    考点：基因工程的原理及技术
    专题：
    分析：获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成）．据图分析可知，人的生长激素基因是人工合成的，采取的方法是利用人的生长激素基因的mRNA为模板，进行反转录．
    目的基因能插入宿主DNA，与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是它们的成分和结构相同，都是由四种脱氧核苷酸组成的双螺旋结构．所有的生物都共用一套密码子，所以人体的生长激素基因能在细菌体内的核糖体上成功表达．
    将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，因质粒上有抗氨苄青霉素基因，且重组质粒上的抗氨苄青霉素基因，也没有被破坏，所以如果大肠杆菌B能够生长，说明已导入了含抗氨苄青霉素基因的普通质粒或重组质粒，反之则没有导入．
    解答： 解：（1）过程①是以mRNA为模板形成基因的过程，属于反转录，此过程需要逆转录酶的参与．
    （2）在构建基因表达载体时，需用限制酶对目的基因和质粒进行切割以形成相同的黏性末端．质粒如果用限制酶Ⅱ来切割的话，将会在质粒在出现两个切口且抗生素抗性基因全被破坏，故质粒只能用限制酶Ⅰ切割（破坏四环素抗性而保留氨苄青霉素抗性，即将来形成的重组质粒能在含氨苄青霉素的培养基中生存，而在含四环素的培养基中不能生存），形成的黏性末端是GATC；目的基因两端都出现黏性末端时才能和质粒发生重组，故目的基因只有用限制酶Ⅱ切割时，才会在两端都出现黏性末端．黏性末端其实是被限制酶切开的DNA两条单链的切口，这个切口上带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好通过碱基互补配对进行连接．在DNA连接酶的作用下形成了磷酸二酯键．
    （3）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是人的基因与大肠杆菌DNA分子的双螺旋结构相同．
    （4）所有的生物都共用一套密码子，所以人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达，过程是生长激素基因
    转录
    mRNA
    翻译
    生长激素．
    （5）过程③需要用Ca2+处理细菌B，增大细胞壁的通透性，使细菌B处于感受态细胞．因本题上有2个标记基因，但抗四环素基因被插入的基因破坏掉，因此剩下的是抗氨苄青霉素抗性基因，如果在含氨苄青霉素的培养基上能生长，说明已经导入了重组质粒或普通质粒A，因为普通质粒和重组质粒都含有抗氨苄青霉素的基因．
    （6）通过检测目的基因是否翻译成蛋白质来判断基因工程是否成功，检测的方法是抗原-抗体杂交技术．
    故答案为：
    （1）反转录（人工合成）              基因表达载体的构建
    （2）ⅠGATCⅡ碱基互补配对            磷酸二酯
    （3）人的基因与大肠杆菌DNA分子的双螺旋结构相同
    （4）共同一套（遗传）密码子                   生长激素基因
    转录
    mRNA
    翻译
    生长激素
    （5）Ca2+感受态细胞            氨苄青霉素           普通质粒或重组质粒
    （6）目的基因是否翻译成蛋白质             抗原-抗体杂交技术
    点评：本题主要考查与基因工程相关的知识，如基因工程的基本工具、基因工程的操作程序等，意在考查考生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释并做出合理判断得出正确结论的能力．
    练习册系列答案
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    1
    2
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    C、目的基因、终止子
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    A、一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
    B、限制酶的活性受温度的影响
    C、限制酶和DNA连接酶的化学本质是相同的
    D、限制酶不可从真核生物中提取

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    A、DNA连接酶
    B、RNA连接酶
    C、DNA聚合酶
    D、限制酶

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    科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达．但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制酶（限制性核酸内切酶）Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，据图回答：

    （1）过程①表示的是采取
     
    的方法来获取目的基因．根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶
     
    切割质粒，用限制酶
     
    酶切割目的基因．
    （2）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是
     
    ．人体与细菌共用一套密码子，因此人的生长激素基因能在细菌体内成功表达．请写出目的基因在细菌中表达的过程
     
    ．
    （3）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的，说明已导入了
     
    ，反之则没有导入．
    （4）若是培育转基因植物，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是
     
    ．

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    A、限制性核酸内切酶具有酶的专一性特点，而DNA连接酶不具有酶的专一性特点
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    下列关于限制酶的说法不正确的是（　　）
    A、一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
    B、限制酶的活性受温度的影响
    C、限制酶能识别和切割RNA
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