Question

【题目】如图为单克隆抗体制备流程示意图．
（1）单克隆抗体制备技术的基础是 ．
（2）细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是 ． 在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的 ， 以保证生命活动的正常进行．
（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是 ．
（4）与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是 ．
（5）若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是 ．

Answer 1

【答案】
（1）动物细胞培养、动物细胞融合
（2）筛选杂交瘤细胞；种类和数量（浓度）
（3）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）
（4）灵敏度高、特异性强
（5）核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜
【解析】解：（1）单克隆抗体的制备涉及的技术有动物细胞融合和动物细胞培养．（2）由图可知，骨髓瘤细胞在HAT培养基上无法生长，所以骨髓瘤细胞自身融合的细胞也不能在该培养基上存活；淋巴细胞和淋巴细胞自身融合的细胞能在HAT培养基上正常生活，但不能增殖．所以，在HAT培养基中培养，目的是筛选出杂交瘤细胞．在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的种类和数量（浓度），以保证生命活动的正常进行．（3）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）．（4）与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备．（5）若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，单克隆抗体是分泌蛋白质，首先在核糖体中合成，在内质网上初步加工，之后内质网边缘以“出芽”形式冒出囊泡，囊泡离开内质网，转移到高尔基体上，与高尔基体膜融合，囊泡中的物质也进入到高尔基体中，在高尔基体中进一步加工成成熟的蛋白质，高尔基体膜也突起形成小泡，小泡离开高尔基体，转移到细胞膜上，小泡中物质释放到细胞膜外．因此，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是：核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜． 所以答案是：（1）动物细胞培养、动物细胞融合；（2）筛选杂交瘤细胞 　种类和数量（浓度）；（3）使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）；（4）灵敏度高、特异性强；（5）核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜
【考点精析】解答此题的关键在于理解单克隆抗体的制备的相关知识，掌握对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞；然后对它进行克隆化培养和抗体检测；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体．