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    【题目】下面是口蹄疫疫苗生产过程示意图，请据图回答下列问题：

    (1)首先从口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白质，具有__________________特性，又不会使动物致病。以合成病毒蛋白的RNA产生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是______________________________________。

    (2)构建基因表达载体所需要的工具酶是________________。基因表达载体除目的基因外，还应包括________________________。

    (3)导入大肠杆菌前需先将大肠杆菌处理为________细胞。

    (4)为检测目的基因是否导入受体细胞，常常要借助载体上________的表达，更准确的方法是利用放射性同位素标记的________作探针与基因组DNA杂交。最后还要检测目的基因是否翻译成了病毒蛋白质，利用的技术是______________。

    【答案】 抗原 逆转录酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 启动子、终止子、标记基因 感受态 标记基因 病毒蛋白基因(目的基因) 抗原—抗体杂交技术

    【解析】试题分析：图示表示利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗，而口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，因此要获得目的基因必须使用逆转录的方法获得。基因工程的过程包括：目的基因的获取、目的基因与运载体重组、目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。

    （1）病毒由核酸和蛋白质组成，其蛋白质外壳为抗原，具有免疫特性，故口蹄疫疫苗生产过程只需提取口蹄疫病毒中控制合成病毒蛋白的RNA部分，以RNA为模板合成DNA的过程属于逆转录，需要逆转录酶。

    （2）基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因。构建基因表达载体一般用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口，再用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端。将切下的目的基因片段，插入质粒的切口处，在DNA连接酶的作用下使质粒与目的基因结合形成重组质粒。

    （3）将目的基因导入微生物细胞前，常用Ca2+处理使其成为感受态细胞。

    （4）标记基因的表达可检测目的基因是否导入受体细胞，除此之外还可以用DNA杂交法和抗原—抗体杂交技术进行检测，其中最准确的是DNA分子杂交分，即利用放射性同位素标记的病毒蛋白基因作探针与基因组DNA杂交。

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