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    图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列． 现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为请回答下列问题：

    （1）如图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由
     
    连接．
    （2）若用限制酶Sma玉完全切割图1中DNA片段，产生的末端是
     
    末端，其产物长度为
     
    ．
    （3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有
     
    种不同长度的DNA片段．
    （4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是
     
    ． 在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加
     
    的培养基进行培养． 经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是
     
    ．
    考点：基因工程的原理及技术
    专题：
    分析：分析题图：外源DNA含有BamHI、MboI、SmaI 3种限制性核酸内切酶的识别序列，其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点在目的基因上．质粒含有MspI、BamHI、MboI3种限制性核酸内切酶的识别序列，其中BamHI酶的切割位点位于抗生素A的抗性基因上；MboI酶的切割位点位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上．
    解答： 解：（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接．
    （2）限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，其切割产生的是平末端．图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp．
    （3）杂合子的基因型为Dd，其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会四种不同的DNA片段．
    （4）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体．用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养．由于同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接，这样会导致部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达．
    故答案为：
    （1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
    （2）平         537bp、790bp、661bp
    （3）4
    （4）BamHⅠ抗生素B   同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接
    点评：本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，要求考生认真分析图1和图2，根据图1中信息计算限制酶SmaⅠ切割产生的片段的种类及长度；根据图1和图2中限制酶的给切割位点，明确构建基因表达载体只能用限制酶BamHⅠ，再运用所学的知识答题即可．
    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    【生物-现代生物科技专题】
    人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示．

    （1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠
     
    中获取．
    （2）图中的高血压相关基因作为
     
    ，质粒作为
     
    ，二者需用
     
    切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有
     
    有关．
    （3）子代大鼠如果
     
    和
     
    ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型．
    （4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是
     
    、早期胚胎培养和胚胎移植．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（　　）
    A、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
    B、取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上
    C、将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时
    D、确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白”的三位科学家．将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光．绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是（　　）
    A、追踪目的基因在细胞内的复制过程
    B、追踪目的基因插入到染色体上的位置
    C、追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布
    D、追踪目的基因编码的蛋白质的空间分布

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    关于发酵过程产物检验的说法，正确的是（　　）
    A、果汁发酵是否产生酒精，可用NaOH来检验
    B、检验醋酸产生的简单易行的方法是品尝或用pH试纸鉴定
    C、泡菜制作过程中亚硝酸盐的含量不能测定
    D、测定果酒、果醋的产生和亚硝酸盐的含量均可用品尝法

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    美英两位科学家因为在胚胎干细胞研究方面的“基因靶向”技术获得2007年度诺贝尔生理学或医学奖．“基因靶向”技术是指利用细胞脱氧核糖核酸（DNA）可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质，定向改造生物某一基因的技术．有科研小组通过右图所示的“基因靶向”技术将小鼠棕褐色的毛色基因导入黑色纯种小鼠细胞的ES细胞中．请据图回答下列问题：
    （1）ES细胞来自第3.5天小鼠囊胚中的
     

    （填字母）细胞，理论上该细胞具有
     
    性．
    （2）在胚胎移植过程中，供、受体动物选择好后，要用激素进行
     
    的处理，使供、受体的生理状态相同，以保证移植的胚胎能够继续正常发育．
    （3）该实验得到的带突变基因的嵌合体小鼠体内至少有
     
    种基因型的体细胞．
    （4）取患者的淋巴细胞（脐带血细胞）作为
     
    细胞，插入正常的外源基因后，再回输体内，以替代、修复或纠正有缺陷的基因，这种方法称为
     
    ；
    （5）与该技术相似，将抗虫基因导入棉花细胞中后产生的愈伤组织可通过
     
    培养分散成单细胞，这种细胞称为
     
    细胞，可发育成胚状体，从而获得大量抗虫棉．
    （6）皮肤细胞是高度分化的细胞，其分化的根本原因是
     
    ，皮肤干细胞经诱导能分化得到多种体细胞，其物质基础是
     
    ．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    近年来，我国东南沿海水域富营养化严重，赤潮灾害频繁发生，这对海洋渔业和生态环境造成严重破坏．请回答以下问题：
    （1）富营养化的海水为赤潮生物大规模爆发提供了
     
    ．
    （2）许多赤潮生物体内含有毒素，分泌或死亡后释放到海水中，致使海洋动物生理失调或死亡：赤潮爆发时常常引起海鸟、鱼、虾和贝类等的大量死亡，甚至会通过食物链进入人体引起中毒．请写出赤潮生物引起人中毒的食物链：
     

    （3）海水的pH值一般在8.0～8.2之间．赤潮发生时海水pH值可达8.5以上，有的甚至达到9.3以上：请分析赤潮引起海水pH值上升的主要原因：
     

    （4）除了产生生物毒素和引起海水pH值变化以外，请另举一例说明赤潮对海洋环境的危害．
     
    ．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    填空回答：
    （1）已知番茄的抗病与感病、红果与黄果、多室与少室这三对相对性状各受一对等位基因的控制，抗病性用A、a表示，果色用B、b表示、室数用D、d表示．
    为了确定每对性状的显、隐性，以及它们的遗传是否符合自由组合定律，现选用表现型为感病红果多室和
     
    两个纯合亲本进行杂交，如果F1表现抗病红果少室，则可确定每对性状的显、隐性，并可确定以上两个亲本的基因型为
     
    和
     
    ．将F1自交得到F2，如果F2的表现型有
     
    种，且它们的比例为
     
    ，则这三对性状的遗传符合自由组合规律．
    （2）若采用植物组织培养技术，从上述F1番茄叶片取材制备人工种子、繁殖种苗，其过程可简述为如下5个步骤：

    上述过程中去分化发生在第
     
    步骤，再分化发生在第
     
    步骤，从叶组织块到种苗形成的过程说明番茄叶片细胞具有
     
    ．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    酶在大规模产业化应用中的核心问题是固定化技术，而酶固定化所依据的基本原理在于酶具有（　　）
    A、热稳定性
    B、催化高效性
    C、催化特异性
    D、可反复使用性

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