Question

【题目】下图是获得人乳铁蛋白的技术路线。（图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三种限制酶的酶切位点如图所示）

据图回答：

（1）已知人乳铁蛋白基因的全部序列，可通过人工合成法或 技术获得人乳铁蛋白基因。据图分析，过程①表示____ ．，该过程需要的限制酶是___ _。筛选含有重组载体的大肠杆菌，培养基中应另添加____ 。

（2）图中过程②最常用的方法是__ __。体外培养受精卵时，需将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养，C02的主要作用是 。

（3）图中过程___ _（填序号）表示胚胎移植，在胚胎移植前要对代孕牛进行___ _处理。

（4）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用 技术。

Answer 1

【答案】

（1）PCR（多聚酶链式反应）（1分） 基因表达载体的构建 HindIII和BamH I 氨苄青霉素

（2）显微注射法 维持培养液的PH

（3）④（1分） 同期发情（1分）

（4）抗原-抗体杂交

【解析】

（1）已知目的基因的全部序列可以采用化学方法人工合成，也可以使用PCR技术进行扩增获得。图中过程1是将目的基因和质粒进行连接的基因表达载体的构建，是基因工程的核心。该过程中需要用限制酶对目的基因和运载体进行切割，分析图可知应使用HindIII和BamH I才能将目的基因完全切下来然后用DNA连接酶进行连接。因为该质粒含有的抗性基因是抗氨苄青霉素的，所以应在含氨苄青霉素的培养基上进行初步筛选。

（2）将目的基因导入到动物受精卵中常使用显微注射法。在动物细胞培养液中加入二氧化碳的目的是维持培养液的PH。

（3）将早期胚胎转移到代孕母牛体内需要经过胚胎移植，即图中的4过程。代孕母牛的生理状况要与供体母牛相同，所以要对它们进行同期发情处理。

（4）检测目的基因是否表达成为蛋白质需要抗原-抗体杂交，如果出现杂交带，说明表达成功。

生物种类	植物	动物	微生物
常用方法	农杆菌转化法	显微注射技术	感受态细胞法
受体细胞	体细胞或受精卵	受精卵	原核细胞
转化过程	将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞染色体的DNA上→表达	将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物	Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子