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    2．限制性核酸内切酶EccR I对DNA的识别序列是5′GAATTC3′，用它处理环状DNA分子时可形成（　　）
    A．两端相同的线性DNA，有黏性末端
    B．两端相同的线性DNA，无黏性末端
    C．两端不同的线性DNA，一端有黏性末端，一端无黏性末端
    D．两种末端无法判断

    分析 关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：
    （1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来．
    （2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
    （3）结果：形成黏性末端和平末端．

    解答 解：两种限制性核酸内切酶识别并切割的方式如图所示：

    所以在基因工程中，限制性核酸内切酶EccR I对DNA的识别序列是5′GAATTC3′，能将碱基G和A之间的磷酸二酯键切割，即切点在G和A之间，用它处理环状DNA分子时可形成两端相同的线性DNA，且都有黏性末端．
    故选：A．

    点评 本题考查基因工程的相关知识，重点考查限制酶的相关知识，要求考生理解限制酶的专一性，明确限制酶的特点及作用，重点掌握它的切割部位，属于高频考点．

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    12．下列生物中属于原核生物的一组是（　　）
    ①葡萄球菌　②链球菌　③草履虫　④衣藻　⑤水绵  ⑥蓝藻．
    A．①⑥⑦B．①④⑥C．①②④D．①②⑥

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    15．下面是某同学所做的生成啤酒酿造实验，请根据其实验过程，回答相关问题：
    实验原理：利用固定化酵母菌分解麦芽汁，生成啤酒．
    实验步骤：
    第一步：酵母细胞活化．取一克干酵母，放入50mL的小烧杯中，加蒸馏水10mL，用玻璃棒搅拌均匀，放置一小时，使其活化．
    第二步：配制海藻酸钠溶液．取0.7g海藻酸钠，放入另一只50mL的小烧杯中，加蒸馏水10mL，并搅拌，直至溶化，用蒸馏水定容至10mL．加热时，注意火候．
    第三步：海藻酸钠与酵母细胞混合．将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化的酵母细胞，充分搅拌均匀．
    第四步：用注射器以恒定的速度将上述混合液滴加到0.05mol/LCaCl2溶液．制成凝胶珠．
    第五步：倒去CaCl2溶液，加无菌水洗涤三次后，将凝胶珠放入500mL三角瓶中，加入300mL麦芽汁溶液，置于25℃下封口，发酵五天后，倒出发酵后的麦芽汁即为啤酒，品尝其口味．
    （1）酵母细胞活化的作用是让休眠状态的酵母细胞恢复到正常生活状态．第二步中注意火候指的是用小火或间断加热．第三步中为什么要等海藻酸钠溶液冷却至室温，再加入活化的酵母细胞？防止高温杀死酵母细胞．
    （2）凝胶珠的组成是海藻酸钠与酵母细胞．海藻酸钠的主要作用是固定酵母细胞．
    （3）上述固定化细胞的方法称为包埋法，形成的凝胶珠颜色为浅黄色．如果形成的凝胶珠颜色过浅，则配制的海藻酸钠溶液浓度过低，如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则配制的海藻酸钠浓度过高．
    （4）与固定化酶相比，该方法的优点是成本更低，操作更容易；省去酶的分离、提纯等工序，同时酶的活性更稳定．
    （5）要想反复使用固定化酵母细胞，实验过程要在严格的无菌条件下进行，同时要控制适宜的温度和PH．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    10．图是某细胞进行有丝分裂的简图（该生物体细胞有6条染色体），据图回答：

    （1）根据C图的特有变化特征，可以判断该图表示植物细胞的有丝分裂简图，判断的依据是具有细胞壁、出现细胞板．
    （2）图示作为一个完整的细胞周期还缺少处于间期的细胞简图，该期细胞内的主要变化特点是完成DNA复制和有关蛋白质的合成．
    （3）观察染色体的最佳时期是A图（填字母），该图细胞的染色体数6条，染色单体数12个，核DNA分子数12个．
    （4）染色体数目加倍发生在D图所示的时期（填字母），其原因是着丝点分裂．
    （5）请在答题卡上绘出该细胞有丝分裂过程中核内染色体数的变化曲线（一个细胞周期）．

    （6）人的体细胞一般只能连续分裂50～60次，而癌细胞可以无限增殖，所以容易形成肿瘤症状．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    17．表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题：

    限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ
    识别序列及切割位点
    （1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前、后，分别含有0、2个游离的磷酸基团．
    （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高．
    （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是SmaⅠ破坏质粒上的抗性基因和外源DNA中的目的基因．
    （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化．
    （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶，若两两相连，则连接产物中有哪几种情况？目的基因自身相连的、运载体自身相连的和目的基因与运载体相连．
    （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了（鉴别和）筛选含有目的基因的受体细胞．
    （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    7．图1是某个哺乳动物（基因型为AaBb）同一器官内的细胞分裂示意图，请回答下列问题：

    （1）图1中不属于减数分裂的是B（填字母）．
    （2）图1中C所示的细胞有0对同源染色体，B与C所示的细胞中的DNA含量之比为2：1．
    （3）图1中C细胞的名称是次级精母细胞，其位于图2的DE段内．图2中形成CD段的原因是染色体的着丝点分裂．正常情况图1中C细胞移向一极的基因组成是Ab，则移向另一极的基因组成是Ab．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    14．育种工作者利用现代生物技术进行了如下育种实验．请据图回答问题：

    （1）图Ⅰ中，生产上常用该方法培养珍贵药材、花卉，其原因主要是这种育种方式能够保持保持亲本的优良性状（遗传特性），实现该过程要应用的关键性激素是细胞分裂素和生长素．
    （2）若图Ⅰ中的离体植物细胞为花粉，则过程①、②所进行的细胞分裂方式是有丝分裂．育种上利用这种方法培育的幼苗再进行秋水仙素（或低温）处理，即可得到稳定遗传的植物品种，其优越性主要表现在明显缩短育种年限．
    （3）图Ⅱ中，过程③的发生必须进行人工处理，先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，然后用聚乙二醇（PEG）等试剂诱导融合，融合成功的标志是再生的细胞壁．
    （4）图Ⅱ所示的育种技术其突出的优点是可以打破生殖隔离（克服远缘杂交不亲和的障碍），因而具有较高的应用价值．
    （5）采用特异性引物对番茄、马铃薯基因组DNA 进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定．图是用该引物对双亲及再生植株1-4进行PCR扩增的结果．据图判断，再生植株1-4中一定是杂种植株的有124．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    11．下列有关细胞生命活动的叙述，正确的是（　　）
    A．分裂期的细胞不进行DNA复制和蛋白质合成
    B．衰老细胞细胞核体积增大
    C．凋亡细胞内的基因表达都下降，酶活性减弱
    D．原癌基因突变促使细胞癌变，抑癌基因突变抑制细胞癌变

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    12．请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：
    （1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”．试管牛的培育需经过体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植以及在母体中发育和产出等过程．
    （2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理．培养的卵母细胞需要发育至减二中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体．
    （3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是促性腺激素．受精过程通常在获能液或专用的受精溶液溶液中进行．
    （4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状．基因工程的四个基本操作步骤是获取目的基因、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定．若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、人干扰素基因（或目的基因）、终止子、标记基因和复制原点等．将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是显微注射法为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是受精卵（受精卵、乳腺细胞）．

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