Question

下列是有关微生物的培养与应用等问题，请分析回答．
（1）图示利用

 

法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步

 

分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意：

 

．
（2）制备培养基的操作顺序是

 

．（用下列字母排序）
a．倒置培养基  b．计算c．溶化d．称量e．灭菌
（3）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序，于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响，结果如下表所示．

物质 突变体	培养基中加入的物质
	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是

 

．
（4）某同学在做微生物实验时，不小心把自生固氮菌和酵母菌混在一起，请你帮助该同学完善实验步骤，将自生固氮菌和酵母菌分离开来：
①制备两种培养基，对两种培养基的处理方式分别是：一种是

 

，另一种是

 

，将两种培养基各自分成两份，依次标上A，a和B，b．
②分别向A、B培养基中接种

 

菌，适宜条件下培养3-4天．
③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a和b培养基中，适宜条件下培养3-4天．其目的是

 

．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养,培养基对微生物的选择作用

专题：

分析：1、分析题图：利用平板划线法接种，需要注意的是接种环在划线时每次划线前要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，划线首尾区不重叠．
2、制备培养基的步骤为计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．
3、分析表格：在多种突变菌株中，如题中表格，加入某物质后“+”最多的物质在最后，加入某物质后“-”最多的物质在最前．

解答： 解：（1）图中展示的是利用平板划线法接种，需要注意的是接种环在划线时每次划线前要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，划线首尾区不重叠，目的是把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（2）制备培养基的步骤为计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．
（3）由于题中给出G是必需的物质，在5种突变菌株中只要加入G，都可以活下来，则G必然是最后的产物；凡是只加了E的都没能存活，则E就是最开头的产物．加A物质，1、2、3、4均没有存活，说明A物质处于第二位；其他类推，C物质处于第三位，B物质处于第四位，D物质处于第五位，因此这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．
（4）①将微生物进行分离一般采用选择培养基．选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长．圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养基上生长繁殖，而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖．根据这一原理可将两种微生物分离开来．所以分别配置 无氮（或不含氮和青霉素）的培养基和  加青霉素（或加青霉素和氮）的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用．
②分别向A、B培养基接种混有两种茵的样品．
③培养的目的是为了分离培养自生固氮菌和酵母菌．
故答案为：
（1）划线法     稀释       ①每次划线前要灼烧 ②冷却后从上一区划线末端开始划 ③首尾区不重叠 
（2）b→d→c→e→a
（3）E→A→C→B→D→G 
（4）无氮     含青霉素
（5）混合菌       
（6）分离培养自生固氮菌和酵母菌

点评：本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了微生物的分离与培养的相关知识，解答本题的关键是根据不同微生物的特点选择恰当的培养基