Question

【题目】民间传统酒曲中含有大量的微生物，现进行下述实验分离酒曲中的主要微生物。

（实验一）将酒曲制成悬液后，分别取不同稀释度的酒曲悬液接种到GPDA培养基上，经培养后根据每个平板的菌落特征，统计不同微生物的菌落数，发现酒曲中主要有两类微生物，即酵母菌和霉菌。

（1）上述操作过程中的接种方法是_____。

（2）根据菌落特征鉴别微生物时，能够观察的菌落特征有_____。

A．形状 B．颜色 C．表面 D．大小

在液体中，酵母菌比霉菌生长快；而酸性培养基中酵母菌比细菌生长更适宜。下述方案将酵母菌从酒曲中进行了分离。

（实验二）用小刀切开曲块，挖取米粒大小一块投入酸性蔗糖豆芽汁培养液中，然后置于25℃培养箱中培养两天。

（3）酸性蔗糖豆芽汁培养液的成分包括黄豆芽、蔗糖、乳酸和水，其中碳源物质主要是_____。

（4）上述实验操作中，需要灭菌的有_____。

A．酒曲 B．小刀 C．培养液 D．培养箱

（5）培养两天后，可见培养液变浑浊，这是因为_____。

（实验三）取浑浊的培养液1mL转接到另一瓶酸性蔗糖豆芽汁培养液中并培养，如此重复多次。多次转接后，取稀释液用如图所示方法接种在蔗糖豆芽汁平板上。

（6）与酸性蔗糖豆芽汁培养液成分相比，蔗糖豆芽汁平板培养基中少了乳酸，多了琼脂。这种成分改变的原因是：_____。

（7）关于图所示的接种方法的叙述，正确的是_____。

A．酒精灯提供了局部无菌环境 B．接种环正在酒精灯火焰上灼烧灭菌

C．接种后的平板需倒置培养 D．该接种方法能得到单个菌落。

Answer 1

【答案】涂布法 ABCD 蔗糖、乳酸（或蔗糖、乳酸、黄豆芽） BC 微生物进行繁殖，数量增加 利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液；此时通过划线要分离酵母菌，此操作需要在固体培养基上进行，因此需加琼脂 ACD

【解析】

微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）要统计不同微生物的菌落数,因此该接种方法为稀释涂布平板法。

（2）鉴定菌种时，作为观察的菌落特征有形状、颜色、大小、表面是否光滑等，故选ABCD。

（3）酸性蔗糖豆芽汁培养液的成分包括黄豆芽、蔗糖、乳酸和水，其中碳源物质主要是蔗糖、乳酸。

（4）酒曲内含有菌种，不能灭菌，A错误；小刀、培养液都需要严格灭菌，BC正确；培养箱需要消毒，D错误。

（5）培养两天后，由于微生物进行繁殖，数量增加，导致培养液变浑浊。

（6）利用酵母菌在酸性液体培养基中的生长优势，通过多次转接，已筛选出酵母菌，因此不必再用酸性培养液；此时通过划线要分离酵母菌，此操作需要在固体培养基上进行，因此需加琼脂。

（7）接种在酒精灯附近进行，提供了局部无菌环境，A正确；图中接种环正在划线，B错误；接种后的平板需倒置培养，C正确；图示接种方法为平板划线法，最终可以得到单个菌落，D正确。