Question

20．图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．
据图回答下面的问题．

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用BamHI和HindIII限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因．
（2）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是A（填字母代号）．
A．启动子      B．teR    C．复制原点        D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是显微注射法．
（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用C（填字母代号）技术．
A．核酸分子杂交  B．基因序列分析  C．抗原-抗体杂交  D．PCR
（5）基因工程中最常用的载体是质粒，除此之外，还可以有动植物病毒和噬菌体的衍生物．

Answer 1

分析 结合题意分析图解：图中质粒包括四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、启动子、复制原点，以及两个限制酶切点，并且两个限制酶切点的位置均在四环素抗性基因上；目的基因上有三个限制酶切点，与质粒对照，共有的是BamH I、Hind III．
图中①表示目的基因导入受体细胞，②表示通过胚胎移植的方式将早期胚胎移植到代孕母牛体内．

解答 解：（1）由图中信息可知，载体上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，目的基因上也有它们的酶切位点，应用此这2种酶切．
（2）当人乳铁蛋白基因和质粒连接成重组质粒后，tet^R基因被人乳铁蛋白基因隔开，不是完整的，而amp^R基因是完整的，所以筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要含氨苄青霉素的培养基上进行．能让目的基因开始表达的是启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．
（3）将目的基因导入到动物中常用显微注射法．
（4）一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法．
（5）基因工程中最常用的载体是质粒，除此之外，还可以有动植物病毒和噬菌体的衍生物．
故答案为：
（1）BamHI和HindIII   
（2）含氨苄青霉素   A
（3）显微注射法 
（4）C
（5）动植物病毒    噬菌体的衍生物

点评 本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了基因工程的限制酶的作用特点、启动子的功能、目的基因导入动物细胞的方法等相关知识，要求考生具有一定的识图能力，并能识记相关基础知识．