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    【题目】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。请回答：

    （1）天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有 （填序号）。

    ①标记基因

    ②多个限制酶切割位点

    ③对受体细胞无害

    ④启动子

    ⑤起始密码子

    （2）若对图1中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性将会 。

    （3）用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是 （从“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/ HindⅢ”、“SmaⅠ/ HindⅢ”中选择）。不能选择其他限制酶的理由分别

    是 、 。

    （4）图3中，①常用的导入方法是 ，为了获得雌性转基因牛，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 ，③过程选用的早期胚胎应发育到 阶段。

    【答案】

    （1）①②③④

    （2）提高

    （3）BamHⅠ/ HindⅢ 若选EcoRⅠ会破坏质粒的复制原点；若选SmaⅠ/ HindⅢ，则构建的重组质粒没有标记基因或复制原点

    （4）显微注射法 性别鉴定 桑椹胚或囊胚

    【解析】

    （1）天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有①标记基因、②多个限制酶切割位点、③对受体细胞无害和④启动子，而⑤起始密码子位于mRNA上。

    （2）碱基之间的配对遵循碱基互补配对原则，即C-G，A-T，且C和G之间有3个氢键，A和T之间有2个氢键，因此C和G的含量越高，DNA分子热稳定性也越高．SmaⅠ酶切位点中均为C-G碱基对，因此插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒中的C和G的含量就越高，其热稳定性也越高。

    （3）若选EcoRⅠ会破坏质粒的复制原点；若选SmaⅠ/HindⅢ，则构建的重组质粒没有标记基因或复制原点，所以用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是BamHⅠ/HindⅢ。

    （4）过程①是将目的基因导入动物受精卵，所用方法是显微注射法；为了获得雌性转基因牛，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定；过程③是将早期胚胎移入代孕母体中所用技术为胚胎移植，时期是发育到桑椹胚或囊胚的早期胚胎。

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