Question

限制酶是在基因工程中用到的工具之一．
（1）如图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ和BglⅡ的识别序列和切割位点：

切割出来的DNA片段可以互补配对的是

 

．
A．BamHⅠ和EcoRⅠB．BamHⅠ和 HindⅢ
C．BamHⅠ和BglⅡD．EcoRⅠ和 HindⅢ
（2）用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题纸的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点．

（3）如下图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1（3.9kb，1kb=1000对碱基）上相应的E-F区域 （0.5kb），那么所形成的重组质粒pZHZ2

 

．
A．既能被E也能被F切开        B．能被E但不能被F切开
C．既不能被E也不能被F切开    D．能被F但不能被E切开

（4）已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点0.4kb．若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样 品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为

 

kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图（答题纸）中．

Answer 1

考点：中心法则及其发展,基因工程的应用

专题：

分析：一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，完全不同的限制酶E和F从合成的DNA上切下VPI目的基因，并将之取代质粒pZHZ1上相应的E-F区域．计算VPI基因大小关键要能获取题图和题干中的有效信息．

解答： 解：（1）分析图解可知，限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的识别序列虽然不同，但是切割后产生的末端均为-GATC-，因此这两种酶切割出来的DNA片段可以互补配对．
（2）图中看出，图中质粒为环状DNA，经限制酶EcoRV单独切割后形成一条链状DNA，说明该酶在质粒上有一个切割位点；而限制酶MboI单独切割，产生了两条链状DNA，说明该酶在质粒上有两个酶切位点，并且两个切点的距离为2.5kb；而两种酶同时切割时产生三个DNA片段，即限制酶EcoRV的酶切位点在11.5kb的DNA上．
（3）由于限制酶具有特异性，同种限制酶切割形成的黏性末端相同．因此由题意可知，限制酶E和F分别切割目的基因和质粒后，目的基因上的两个黏性末端与质粒上的两个黏性末端分别完全相同，因此形成重组质粒后，仍然具有这两种酶的识别序列，所以既能被E也能被F切开．
（4）已知质粒pZHZ1的长度为3.9kb，其中EF区域长度为0.5kb，所以切去EF段后的质粒长度为3.9-0.5=3.4kb．现用限制酶G切割重组质粒pZHZ2样品，结果被酶G切割成1.6kb和3.1kb两个片段，可知重组质粒pZHZ2的总长度为1.6+3.1=4.7kb，所以目的基因长度为4.7-3.4=1.3kb．
重组质粒中G的切割位点距E的切割位点0.8kb，单独用限制酶G切割后产生1.6kb和3.1kb两个片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的G酶识别位点外，还有一个G酶识别位点；H酶的酶切位点距F0.4kb，用H单独酶切后产生1.2kb和3.5kb两个片段，说明在重组质粒中含有一个H的酶切位点．根据题中信息提示“目的基因内部的酶G、酶H切割位点标注在图上”，可确定在EF之间分别含有G和H的一个识别位点．可断定G的识别位点，在距离E点右侧0.8kb（1.6-0.8）处，H的识别位点在距F左侧0.8kb（1.2-0.4）处，如下图所示：

故答案为：
（1）C
（2）图略
（3）A
（4）1.3

点评：题具有一定的难度和综合性，考查基因工程的相关知识，涉及基因工程限制酶酶切位点的确定等相关知识，意在考查考生的识图能力、理解能力即数据处理能力．