[题目]下图1为某种质粒结构.LacZ基因编码的酶能使无色的X-gal变为蓝色.Amp为氨苄青霉素抗性基因.图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列和切点.回答下列问题(1)若要筛选成功导入目的基因的重组质粒.培养基中应加入的物质有和 .构建重组质粒时需要的工具酶有 .(2)用BamHI和BglII两种限制酶切割目的基因和质粒.构建重组质粒后导入大� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】下图1为某种质粒结构，LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列和切点。回答下列问题

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有______________和_________________。构建重组质粒时需要的工具酶有_________________。

（2）用BamHI和BglII两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了_____________。

（3）BamHI酶切的DNA末端与BglII酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_____________（要求写出双链）。如用BamHI酶、BglII酶和EcoRI酶对于该重组质粒进行切割，能切开_______个切口。

（4）下图中A、B、C、D表示利用PCR扩增目的基因过程中可能用到的四种引物，回答下列相关问题：

①PCR技术需要用到_____________酶。

②若需要扩增图中目的基因，由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，则利用PCR技术扩增该基因时需要选择_____________（A、B、C、D）的组合作为引物。

【答案】氨苄青霉素 X—gal 限制酶和DNA连接酶不含目的基因的质粒（或空白质粒） 2 Tag酶（热稳定DNA聚合酶） B和C

【解析】

1、用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒，质粒中Lac Z基因被破坏，氨苄青霉素抗性基因完好。

2、BamH I酶切的DNA 末端与Bgl II酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，BamH I酶和Bgl II酶均不能识别和切割。

（1）由图1可知，质粒中含有，Lac Z基因和Amp基因（即氨苄青霉素抗性基因）。由图2可知，可BamH I且切割质粒，Lac Z基因被破坏，无法使无色的X—gal变为蓝色，显白色。因此，在培养基中应加入的物质有氨苄青霉素和X—gal，只有成功导入目的基因的重组质粒的细菌才能不被氨苄青霉素杀死，同时表现为白色。构建重组质粒时需要的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

（2）用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒，质粒中Lac Z基因被破坏，无法使无色的X—gal变为蓝色，显白色。因此，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了空白质粒。

（3）BamH I限制酶的识别和切割位点为，Bgl II限制酶的识别和切割位点为，因此BamH I酶切的DNA 末端与Bgl II酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为。重组质粒如下图所示，用BamH I酶、Bgl II酶和EcoR I酶对于该重组质粒进行切割，能在BamH I和EcoR I的切割位点上切割，BamH I酶切的DNA 末端与Bgl II酶切的DNA末端连接部位不能被识别和切割，因此能切开2个切口。

（4）①PCR技术需要用到Tag酶。

②若需要扩增图中目的基因，由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，则利用PCR技术扩增该基因时需要选择B和C的组合作为引物。

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