由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱.有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种．(1)图甲中.过程①需要的酶有．为达到筛选目的.平板内的固体培养基应以作为唯一碳源．②.③过程需要重复几次.目的是．(2)某同学尝试过程③的操作.其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）．
（1）图甲中，过程①需要的酶有

．为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以

作为唯一碳源．②、③过程需要重复几次，目的是

．
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示．该同学的接种方法是

；推测该同学接种时可能的操作失误是

．
（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种

菌的发酵罐需要先排气，其原因是

．
（4）若要对培养液中的酵母菌进行计数，下表是取0.1ml菌液进行涂布时，不同稀释倍数下统计的平板培养基上的菌落数：

稀释倍数		10³	10⁴	10⁵
重复实验	1	1498	126	12
	2	1208	128	9
	3	1189	133	6

根据表中数据估算培养液中酵母菌的浓度约为

个/ml

考点：基因工程的原理及技术,微生物的分离和培养

专题：

分析：分析图甲：图甲是将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种的过程．图中①表示基因表达载体的构建过程；②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌．
分析图乙：图乙是一个平板经培养后的菌落分布，可见其采用的是稀释涂布平板法，但图中群落分布相对较集中．

解答： 解：（1）图甲过程①表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌．
（2）由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的．
（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气．
（4）根据表中数据可知，稀释倍数为10³和10⁵时，各组数据之间的误差较大，而稀释倍数为10⁴时，各组数据比较接近，同时用稀释涂布平板法计数时，要选用菌落数在30-300间的平板培养基，因此可以根据稀释倍数为10⁴时的数据估算培养液中酵母菌的浓度，即

126+128+133

×104×10=1.29×10⁷个/ml．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶   淀粉     进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法    涂布不均匀
（3）工程酵母     工程菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO₂的速率更快
（4）1.29×10⁷

点评：本题以工程菌为素材，结合图表综合考查基因工程、微生物的实验室培养、果酒制作、培养液中酵母菌数量的变化，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤；识记微生物的接种方法，能根据图乙判断接种方法及图乙现象出现的原因；能分析表格，明确稀释倍数为10³和10⁵时，各组数据之间的误差较大，可通过稀释倍数为10⁴时的数据估算培养液中酵母菌的浓度．

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（1）图中的实线表示

，虚线表示

．“光斑”照耀开始时，限制光合作用产物（糖类）合成的主要因素是

．
（2）当“光斑”移开时，0₂的释放速率发生如图所示变化的原因是：

．而C0₂吸收速率发生如图所示变化的原因是

．

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（2）将装置A、B均置于相同且适宜的光照等条件下，均关闭夹子③，并打开装置A的夹子

，打开装置B的夹子

．观察小圆形叶片上浮情况．
结果：

．
（3）一段时间后，打开两个装置的夹子③，并关闭装置A的夹子①、②，关闭装置B的夹子②，用真空泵抽去两支试管内液体中和叶肉细胞间隙中的气体后，敞开试管口．
结果：

．
（4）用纱布包住装置B的试管，部分遮光，同时打开装置A、B的夹子①、②，并关闭夹子③，观察小圆形叶片上浮的情况．
结果：

．

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