Question

20．某地的池塘中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A．研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）．实验的主要步骤如图所示．请分析回答问题：
（1）长期保存“目的菌”采用甘油管藏的方法．
（2）培养基中加入化合物A的目的是筛选“目的菌”，这种培养基属于选择培养基．
（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少（减少、增加、不变）的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量增加．
（4）培养基平板平常应倒过来放置． 在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵ 的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为13、156、462、178和191．该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较少一些．
（5）接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；
（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、菌种保存

	临时保存法	甘油管藏法
适用对象	频繁使用的菌种	长期保存的菌种
培养及类型	固体斜面培养基	液体培养基
温度	4℃	-20℃
方法	菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上	将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存
缺点	菌种易被污染或产生变异	\\

解答 解：（1）长期保存“目的菌”采用甘油管藏法．
（2）培养基中加入化合物A的目的是筛选“目的菌”，因为只有能分解化合物A的微生物才能在该培养基上生存，因此这种培养基属于选择培养基．
（3）若培养液中含有目的菌，则培养若干天后，培养瓶中的化合物A含量应该减少．因此培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量增加．
（4）培养基平板平常应倒过来放置． 在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵ 的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为13、156、462、178和191．由此可见，该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法；由于两个或多个细菌连在一起时只能在平板上观察到一个菌落，因此与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较少一些．
（5）接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后，才能倒掉．
故答案为：
（1）甘油管藏
（2）选择       
（3）减少　   增加
（4）倒过来     稀释涂布平板法　     少
（5）检测培养基平板灭菌是否合格       
（6）灭菌

点评 本题考查微生物分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术和保藏菌种的两种方法，掌握计数微生物的方法及相关细节，能结合所学的知识准确答题．