10、（山东）（8分）（生物一生物技术实践）

人参是一种名贵中药材，其有效成分主要是人参皂苷。利用细胞培养技术生产人参皂苷的大致流程如下：

请回答：

（1）配制诱导愈伤组织的固体培养基，分装后要进行                     。

     接种前，要对人参根进行              。

（2）用于离体培养的根切块，叫做                 。培养几天后发现少数培养基被污染，若是有颜色的绒毛状菌落，属于             污染；若是有光泽的黏液状菌落，属于            

     污染。

（3）用少量           酶处理愈伤组织，获取单细胞或小细胞团，在液体培养基中进行悬浮培养，可有效提高人参皂苷合成量。

（4）人参皂苷易溶于水溶性（亲水性）有机溶剂，从培养物干粉中提取人参皂苷宜选用          

     方法，操作时应采用                加热。

9、利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。　　

（1）实验步骤：　　

①配置________（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为________。　　

②将_____________接入已灭菌的培养基平板上。　　

③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是___________________。　　

④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现_______________现象的菌落即为初选菌落，经分离、纯化后即可达到实验目的。　　

（2）若已得到二株变异菌株I和II，其淀粉转化率较高，经测定菌株I淀粉酶的催化活性高，菌株II的淀粉酶蛋白含量高，经进一步研究发现，突变发生在淀粉酶基因的编码区或非编码区，可推测出菌株I的突变发生在_________区，菌株II的突变发生在____________区。

8、（宁夏）.【生物——选修1生物技术实践】（15分）

   （1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。

   （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。

   （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

   （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。

   （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。

   （6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

7、（江苏）(6分)酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛(以植物为食)消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

(注：“+”越多表示绿色越深，“一”表示颜色无显著变化)

(1)实验过程中，需要轻摇试管，其目的是▲   ，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。

(2)从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有  ▲   等多种酶。该实验中▲  是空白对照组，其设置意义是▲  。

(3)用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用  ▲ 洗涤。

(4)原生质体是否符合要求还需进行检验，其检验的方法是  ▲ 。

三、综合题

（每空？ 分，共？ 分）

6、（江苏多选）下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有

  A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞

  B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质

C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA

D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化

二、填空题

（每空？ 分，共？ 分）

5、（江苏多选）加工橘子罐头，采用酸碱处理脱去中果皮(橘络)，会产生严重污染。目前使用酶解法去除橘络，可减少污染。下列生长在特定环境中的4类微生物，可以大量产生所用酶的有

  A．生长在麦麸上的黑曲霉    B．生长在酸奶中的乳酸菌

C．生长在棉籽壳上的平菇    D．生长在木屑上的木霉

4、（江苏）下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是

  A．固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显

B．固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧

C．利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件

  D．利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物

3、（重庆）下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是

  A大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个环状DNA分子

  B在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源

  C用大肠杆菌工程菌生产干扰素时．应及时添加核酸等生长因子

  D处于对数期的大肠杆菌．常作为生产用的菌种和科研的材料

2、（安徽）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是

A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白膝培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B.取10⁴、10⁵ 、10⁶倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37⁰C恒温培养24-48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数