Question

【题目】A．随着全球环境污染严重，石油资源逐步减少，近年来乙醇等“绿色能源”的开发备受关注。科技工作者研制出利用秸秆生产燃料酒精的技术，大致流程如下图所示。

（1）若要从土壤中分离出能分解植物秸秆的微生物，培养基中的碳源是____________,对该培养基可采取________________的方法进行灭菌。

（2）某同学对分离得到的微生物培养液进行数量测定,在稀释倍数为105对应的培养基中测定平板上菌落数的平均值为23．4，则每毫升样品中的细菌数是（涂布平板时稀释液的体积为0．2mL）_________________。

（3）用上述方法测定目的菌的密度，实际活菌数量要比测得的菌落数量多，原因是________________。

（4）上述流程图中，糖液发酵产生酒精需要的菌种是_________________，酒精是在目的菌的________（结构）中产生的。

B．马铃薯块莲含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发。下图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答问题：

（1）为获取抗盐基因,可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的___________来合成cDNA。

（2）上图构建基因表达载体时，最好选用___________酶切割含目的基因的外源DNA和质粒，不能使用Sma I切割的原因是_______________。构建好的重组质粒在抗盐基因前要加上特殊的启动子，启动子是一段有特殊结构的___________片段。

（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T—DNA上的原因是__________。通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以__________。

（4）上图转基因抗盐马铃薯培育过程中，属于脱分化阶段的是_____________（填序号）。从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是____________。

Answer 1

【答案】A．（1）纤维素 高压蒸汽灭菌

（2）1．17×107

（3）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落

（4）酵母菌 细胞质基质

B．（1）mRNA

（2）EcoRI和HindIII SmaI会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因 DNA

（3）T—DNA是可以转移的DNA （T一DNA能携带目的基因整合到受体细胞染色体的DNA ） 稳定维持和表达

（4）⑤ 将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地或较高浓度盐溶液中，观察是否能正常生

【解析】A．（1）筛选目的微生物需要使用选择培养基，培养基中的碳源为纤维素，培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌．

（2）根据题意可知，每毫升样品中的菌落数是23．4×105÷0．2=1．17×107．

（3）用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，所以实际活菌数量要比测得的菌落数量多．

（4）上述流程图中，发酵阶段需要的菌种是酵母菌，酵母菌无氧呼吸可以产生酒精，生产酒精要控制的必要条件是无氧，无氧呼吸的场所是细胞质基质．

B．（1）获取目的基因时，可以以mRNA为模板逆转录合成cDNA．

（2）用SamⅠ酶切割会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因，因此构建基因表达载体时不能用SamⅠ酶；因此，为了防止目的基因或质粒自身环化，在构建基因表达载体时，最好选用EcoRⅠ和HindⅢ酶切割含目的基因的外源DNA和质粒．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶结合的部位．

（3）将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T﹣DNA上的原因是T﹣DNA是可以转移的DNA（T﹣DNA能携带目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上）．通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入到马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以稳定维持和表达．

（4）图中⑤属于脱分化阶段．从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是将转基因马铃薯幼苗栽种在盐碱地或较高浓度盐溶液中，观察是否能正常生长．