Question

【题目】对艾滋病的疫苗研究，经历了三个“时代”．早期，科学工作者从HIV感染自愈者体内采取相应免疫细胞，使之与骨髓瘤细胞结合，生产HIV的抗体，具体过程见下图1：

随后，转基因技术被运用到了HIV的疫苗的研制工作中，科学工作者研制的第二代HIV疫苗的操作简要路径见下图2：

科学工作者发现一种蛋白质（D4﹣Ig），它能与HIV表面的糖蛋白结合，从而使HIV失去侵染T细胞的能力；腺相关病毒是杆状病毒，无激活复制基因，对人体相对安全．
腺相关病毒其基因组中含有常用病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，为安全起见，需要去除复制基因．目前，科学家利用其相关实验研究，实验工作相关信息如图4：

（1）上述过程①的生物技术称为技术；
（2）要获得纯净、单一的抗体，上图过程最关键的操作要点是 ．
（3）过程②所用限制酶必须一致，其理由是 ．
（4）用该方法产生的疫苗进行接种，与上述图1的抗体注射方法的免疫功能相比，其关键的优势是；
（5）该疫苗接种，具有一定的HIV防疫作用，但不能治愈HIV感染者，从免疫学角度分析，不能治愈的主要原因是 ．
（6）用X，Y两种限制酶作用于病毒DNA片段，并进行电泳分析，其结果见图3．

A至D选项中，关于两种酶切位置的判断正确的是
（7）目的基因运载体是 ．
（8）过程①需要对D4﹣Ig蛋白进行 ， 才能人工合成D4﹣Ig基因．这个过程产生的基因组可能在某些碱基上有所不同，其原因是
（9）被两种病毒双重感染的T细胞解体的HIV病毒相比入侵时的差异是 ．

Answer 1

【答案】
（1）细胞融合
（2）单个免疫B细胞与重骨髓瘤细胞融合或在选择培养基上进行选择
（3）只要切口和接口具有相同的粘性末端即可
（4）血液中抗体含量因代谢会逐渐降低，而抗原可以激发B细胞产生记忆细胞，较长时间维持较高抗体浓度
（5）HIV寄生于细胞内，抗体只能应对内环境体液中的病毒
（6）C
（7）腺相关病毒（或腺相关病毒粒子和腺相关病毒基因组）
（8）氨基酸种类与序列测定；有些氨基酸会有2种以上的密码子
（9）HIV病毒的衣壳蛋白已经与D4﹣Ig蛋白结合，失去再感染T细胞能力
【解析】解：（1）上述①为HIV自愈者免疫细胞与骨髓瘤细胞融合的过程，该过程需要采用细胞融合技术．（2）要获得纯净、单一的抗体，最关键的操作要点是单个免疫B细胞与重骨髓瘤细胞融合或在选择培养基上进行选择．（3）②是基因表达载体的构建过程，该过程需要用同种限制酶切割外源DNA片段和质粒，以产生相同的黏性末端，只要切口和接口具有相同的黏性末端即可被DNA连接酶连接．（4）用该方法产生的疫苗进行接种，与上述图1的抗体注射方法的免疫功能相比，其关键的优势是血液中抗体含量因代谢会逐渐降低，而抗原可以激发B细胞产生记忆细胞，较长时间维持较高抗体浓度；（5）HIV寄生于细胞内，抗体只能应对内环境体液中的病毒，因此该疫苗接种，具有一定的HIV防疫作用，但不能治愈HIV感染者．（6）A、用X酶单独切割能形成500、5000和4500三种大小的片段，这与图3不符，A错误；
B、用Y酶单独切割能形成500和9500两种大小的片段，这与图3不符，B错误；
C、用X酶单独切割能形成3500、6000和500三种大小的片段，用Y酶单独切割能形成8000和2000两种大小的片段，用X酶和Y酶同时切割能形成4500、3500、1500和500四种大小的片段，这与图3相符，C正确；
D、用Y酶单独切割能形成1500和8500两种大小的片段，这与图3不符，D错误．
故选：C．（7）由图可知，目的基因运载体是腺相关病毒（或腺相关病毒粒子和腺相关病毒基因组）．（8）过程①是采用人工合成法获得目的基因，该过程需要对D4﹣Ig蛋白进行氨基酸种类与序列测定，才能人工合成D4﹣Ig基因．这个过程产生的基因组可能在某些碱基上有所不同，其原因是密码子具有简并性，即有些氨基酸会有2种以上的密码子．（9）根据题干信息“蛋白质（D4﹣Ig），它能与HIV表面的糖蛋白结合，从而使HIV失去侵染T细胞的能力”可知，被两种病毒双重感染的T细胞解体的HIV病毒相比入侵时的差异是HIV病毒的衣壳蛋白已经与D4﹣Ig蛋白结合，失去再感染T细胞能力．
所以答案是：（1）细胞融合（2）单个免疫B细胞与重骨髓瘤细胞融合或在选择培养基上进行选择（3）只要切口和接口具有相同的粘性末端即可（4）血液中抗体含量因代谢会逐渐降低，而抗原可以激发B细胞产生记忆细胞，较长时间维持较高抗体浓度（5）HIV寄生于细胞内，抗体只能应对内环境体液中的病毒．（6）C（7）腺相关病毒（或腺相关病毒粒子和腺相关病毒基因组）（8）氨基酸种类与序列测定 有些氨基酸会有2种以上的密码子（9）HIV病毒的衣壳蛋白已经与D4﹣Ig蛋白结合，失去再感染T细胞能力
【考点精析】掌握基因工程的原理及技术和单克隆抗体的制备是解答本题的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重组技术；对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞；然后对它进行克隆化培养和抗体检测；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体．